Биоконсервация: Полное руководство по хранению биологических материалов

Биоконсервация, сохранение биологических материалов для будущего использования, является краеугольным камнем современных биомедицинских исследований, диагностики и терапии. Это всеобъемлющее руководство подробно рассматривает принципы, методы, применение и этические аспекты биоконсервации, предоставляя глобальный взгляд на эту критически важную область.

Что такое биоконсервация?

Биоконсервация охватывает ряд методов, направленных на поддержание жизнеспособности и целостности биологических материалов, таких как клетки, ткани, органы, ДНК и другие биообразцы. Цель состоит в том, чтобы минимизировать деградацию и сохранить функциональные свойства этих материалов в течение длительного времени. Эти материалы необходимы для различных применений, в том числе:

• Исследования: изучение заболеваний, разработка новых методов лечения и понимание фундаментальных биологических процессов.
• Диагностика: выявление заболеваний, мониторинг состояния здоровья пациентов и персонализация стратегий лечения.
• Терапия: клеточная терапия, регенеративная медицина и трансплантация.
• Разработка лекарств: скрининг потенциальных кандидатов в лекарства и понимание механизмов их действия.
• Охрана природы: сохранение исчезающих видов и поддержание биоразнообразия.

Распространенные методы биоконсервации

Используется несколько методов биоконсервации, каждый из которых имеет свои преимущества и недостатки. Выбор метода зависит от типа биологического материала, предполагаемого применения и продолжительности хранения.

Криоконсервация

Криоконсервация включает в себя охлаждение биологических материалов до сверхнизких температур, обычно с использованием жидкого азота (-196°C или -320°F). При этих температурах биологическая активность фактически останавливается, что предотвращает деградацию и позволяет осуществлять долгосрочное хранение. Ключевые аспекты криоконсервации включают:

• Криопротекторы (КПА): Эти вещества, такие как диметилсульфоксид (ДМСО) и глицерин, добавляются к материалу для минимизации образования кристаллов льда во время замораживания и оттаивания, которые могут повредить клетки. Концентрация и тип КПА должны быть тщательно подобраны для каждого типа клеток и тканей.
• Программное замораживание: Медленное снижение температуры с контролируемой скоростью (например, 1°C в минуту) минимизирует образование кристаллов льда внутри клеток. Для достижения такого контролируемого охлаждения используется специализированное оборудование.
• Витрификация: Альтернатива медленному замораживанию, витрификация, заключается в быстром охлаждении материала до стекловидного состояния без образования кристаллов льда. Это требует высоких концентраций КПА и чрезвычайно высоких скоростей охлаждения.
• Хранение: Образцы обычно хранятся в дьюарах с жидким азотом или в паровой фазе над жидким азотом. Надлежащий мониторинг температуры и уровня жидкого азота имеет решающее значение для обеспечения целостности образцов.

Пример: Криоконсервация широко используется для хранения стволовых клеток для трансплантации костного мозга и применения в регенеративной медицине. Например, гемопоэтические стволовые клетки регулярно криоконсервируют для аутологичной (собственные клетки пациента) или аллогенной (донорские клетки) трансплантации для лечения лейкемии, лимфомы и других заболеваний крови. В Японии исследователи изучают методы криоконсервации для сохранения зародышевой плазмы исчезающих видов.

Хранение в холодильнике

Хранение в холодильнике предполагает хранение биологических материалов при температурах выше точки замерзания, обычно от 2°C до 8°C (от 35°F до 46°F). Этот метод подходит для краткосрочного хранения образцов, которые не требуют длительной консервации. При хранении в холодильнике необходимо учитывать следующее:

• Контроль температуры: Поддержание стабильной температуры в указанном диапазоне необходимо для предотвращения деградации.
• Стерильность: Предотвращение микробного загрязнения имеет решающее значение для поддержания целостности образца.
• Подходящие контейнеры: Важно использовать подходящие контейнеры для минимизации испарения и поддержания гидратации образца.

Пример: Образцы крови для рутинного клинического анализа обычно хранятся при 4°C в течение короткого времени перед обработкой. Аналогичным образом, некоторые вакцины требуют хранения в холодильнике для сохранения их эффективности.

Лиофилизация (сублимационная сушка)

Лиофилизация включает удаление воды из замороженного образца путем сублимации в вакууме. В результате этого процесса получается стабильный, сухой продукт, который можно хранить при комнатной температуре в течение длительного времени. Ключевые этапы лиофилизации включают:

• Замораживание: Сначала образец замораживают, чтобы вода затвердела.
• Первичная сушка: Затем замороженная вода удаляется путем сублимации в вакууме.
• Вторичная сушка: Остаточная влага удаляется путем повышения температуры в вакууме.

Пример: Лиофилизация обычно используется для консервации бактерий, вирусов и белков для исследовательских и диагностических целей. Например, бактериальные культуры, используемые для контроля качества в фармацевтическом производстве, часто лиофилизируют для долгосрочного хранения и стабильности.

Химическая консервация

Химическая консервация предполагает использование химических фиксаторов, таких как формальдегид или глутаральдегид, для сохранения образцов тканей. Эти фиксаторы сшивают белки и стабилизируют клеточные структуры, предотвращая деградацию. Ключевые моменты при химической консервации включают:

• Выбор фиксатора: Выбор фиксатора зависит от предполагаемого применения. Формальдегид обычно используется для рутинной гистологии, в то время как глутаральдегид часто применяется для электронной микроскопии.
• Время фиксации: Продолжительность фиксации имеет решающее значение для обеспечения адекватной консервации без чрезмерного повреждения.
• Условия хранения: Фиксированные ткани обычно хранятся в формалине или спирте.

Пример: Биоптаты тканей для диагностики рака регулярно фиксируются в формалине для сохранения клеточной морфологии и возможности микроскопического исследования.

Применение биоконсервации

Биоконсервация играет критически важную роль в широком спектре применений, включая:

Биобанкинг

Биобанки — это репозитории, которые собирают, обрабатывают, хранят и распространяют биологические образцы и связанные с ними данные для исследовательских целей. Они являются важными ресурсами для изучения заболеваний, разработки новых методов диагностики и терапии, а также для развития персонализированной медицины.

• Популяционные биобанки: Собирают образцы и данные от больших популяций для изучения генетических и средовых факторов, способствующих развитию заболеваний. Примерами являются Биобанк Великобритании и Эстонский биобанк.
• Биобанки, ориентированные на конкретные заболевания: Сосредоточены на сборе образцов и данных от пациентов с определенными заболеваниями, такими как рак или диабет.
• Клинические биобанки: Интегрированные в системы здравоохранения, эти биобанки собирают образцы и данные от пациентов, проходящих рутинное клиническое лечение.

Регенеративная медицина

Регенеративная медицина направлена на восстановление или замену поврежденных тканей и органов с использованием клеток, биоматериалов и факторов роста. Биоконсервация имеет решающее значение для хранения клеток и тканей для этих видов терапии.

• Клеточная терапия: Включает трансплантацию клеток пациентам для лечения заболеваний. Например, трансплантация стволовых клеток при лейкемии и CAR-T-клеточная терапия при раке.
• Тканевая инженерия: Включает создание функциональных тканей и органов в лаборатории для трансплантации.

Разработка лекарств

Биоконсервированные клетки и ткани используются при разработке лекарств для скрининга потенциальных кандидатов в лекарства, понимания механизмов их действия и оценки токсичности.

• Высокопроизводительный скрининг: Использование автоматизированных систем для скрининга больших библиотек соединений на клеточных мишенях.
• Исследования метаболизма и фармакокинетики лекарств (DMPK): Изучение того, как лекарства метаболизируются и выводятся из организма.

Биология сохранения

Биоконсервация используется для сохранения генетического материала исчезающих видов и поддержания биоразнообразия.

• Криоконсервация спермы и яйцеклеток: Сохранение репродуктивных клеток для искусственного оплодотворения и экстракорпорального оплодотворения.
• Криоконсервация эмбрионов: Сохранение эмбрионов для будущих программ разведения.
• Банкинг ДНК: Хранение образцов ДНК для генетического анализа и природоохранных мероприятий.

Контроль качества в биоконсервации

Поддержание качества и целостности биоконсервированных материалов необходимо для обеспечения надежных результатов исследований и клинических исходов. Основные меры контроля качества включают:

• Стандартизированные протоколы: Использование стандартизированных протоколов для сбора, обработки, хранения и извлечения образцов.
• Мониторинг температуры: Постоянный мониторинг температуры хранения для обеспечения того, чтобы образцы находились в требуемом диапазоне.
• Анализы жизнеспособности: Оценка жизнеспособности и функциональной активности клеток после оттаивания.
• Тестирование на контаминацию: Регулярное тестирование образцов на микробное загрязнение.
• Управление данными: Ведение точных и полных записей обо всех образцах и связанных с ними данных.

Пример: Биобанки часто используют стандартные операционные процедуры (СОП), основанные на лучших практиках таких организаций, как Международное общество биологических и экологических репозиториев (ISBER), для обеспечения постоянного качества образцов. Эти СОП охватывают все аспекты биобанкинга, от сбора и обработки образцов до их хранения и распространения.

Этические соображения в биоконсервации

Биоконсервация поднимает несколько этических вопросов, в том числе:

• Информированное согласие: Получение информированного согласия от доноров перед сбором и хранением их биологических образцов. В согласии должны быть четко объяснены цель исследования, потенциальные риски и выгоды, а также право донора отозвать свои образцы.
• Приватность и конфиденциальность: Защита приватности и конфиденциальности личной информации доноров.
• Безопасность данных: Обеспечение безопасности данных, связанных с биологическими образцами.
• Собственность и доступ: Установление четких правил в отношении права собственности и доступа к биологическим образцам и данным.
• Коммерциализация: Решение этических проблем, связанных с коммерциализацией биологических образцов и данных.

Пример: Многие страны ввели нормативные акты для защиты прав участников биобанков и обеспечения этичного проведения исследований в области биобанкинга. Эти нормативные акты касаются таких вопросов, как информированное согласие, конфиденциальность данных и доступ к образцам и данным.

Будущие тенденции в биоконсервации

Область биоконсервации постоянно развивается, и текущие исследования направлены на совершенствование существующих методов и разработку новых. Некоторые ключевые тенденции включают:

• Автоматизация: Автоматизация процессов биоконсервации для повышения эффективности и снижения вариабельности.
• Микрофлюидика: Использование микрофлюидных устройств для точного контроля скоростей замораживания и оттаивания.
• Нанотехнологии: Разработка наночастиц для доставки криопротекторов и повышения выживаемости клеток.
• Биопечать: Сочетание биоконсервации с биопечатью для создания функциональных тканей и органов.
• ИИ и машинное обучение: Использование ИИ и машинного обучения для оптимизации протоколов биоконсервации и прогнозирования качества образцов.

Международные стандарты и руководства

Несколько международных организаций предоставляют стандарты и руководства по биоконсервации для обеспечения единообразия и качества в различных биобанках и исследовательских институтах. К ним относятся:

• Международное общество биологических и экологических репозиториев (ISBER): Публикует лучшие практики по биобанкингу и биоконсервации.
• Всемирная сеть биобанков (WBAN): Глобальная сеть биобанков, способствующая сотрудничеству и стандартизации.
• Национальный институт стандартов и технологий (NIST): Разрабатывает стандарты и эталонные материалы для биоконсервации.
• Стандарты ISO: Международная организация по стандартизации (ISO) разработала стандарты, связанные с биобанкингом и биоконсервацией, такие как ISO 20387:2018 «Биотехнология — Биобанкинг — Общие требования к биобанкингу».

Проблемы в биоконсервации

Несмотря на значительные успехи, биоконсервация все еще сталкивается с рядом проблем:

• Образование кристаллов льда: Образование кристаллов льда во время замораживания и оттаивания может повредить клетки и ткани.
• Токсичность криопротекторов: Криопротекторы могут быть токсичны для клеток в высоких концентрациях.
• Ограниченный срок хранения: Некоторые биоконсервированные материалы имеют ограниченный срок хранения даже при оптимальных условиях.
• Стоимость: Биоконсервация может быть дорогостоящей, особенно при долгосрочном хранении большого количества образцов.
• Стандартизация: Отсутствие стандартизации между различными биобанками и исследовательскими институтами может затруднить сравнение результатов.

Заключение

Биоконсервация — это критически важная область с далеко идущими последствиями для биомедицинских исследований, диагностики и терапии. Понимая принципы, методы, применение и этические аспекты биоконсервации, исследователи и клиницисты могут эффективно использовать биологические материалы для продвижения научных знаний и улучшения здоровья человека. По мере развития технологий методы биоконсервации будут становиться еще более совершенными, позволяя сохранять биологические материалы на более длительные сроки и с большей точностью. Это откроет путь для новых открытий и инноваций в медицине и за ее пределами.

Это руководство дает базовое понимание биоконсервации. Для конкретных применений и подробных протоколов настоятельно рекомендуется консультироваться с экспертами и обращаться к соответствующей научной литературе. Продолжение исследований и разработок в области биоконсервации необходимо для преодоления существующих проблем и раскрытия всего потенциала этой преобразующей области.