Biomédicaments : Un guide complet sur la production de médicaments protéiques

Les biomédicaments, également connus sous le nom de produits biologiques, représentent un segment en croissance rapide de l'industrie pharmaceutique. Contrairement aux médicaments traditionnels à petites molécules synthétisés chimiquement, les biomédicaments sont de grandes molécules complexes produites à l'aide de cellules ou d'organismes vivants. Les médicaments protéiques, un sous-ensemble important des biomédicaments, offrent des thérapies ciblées pour un large éventail de maladies, notamment le cancer, les maladies auto-immunes et les maladies infectieuses. Ce guide offre une vue d'ensemble complète de la production de médicaments protéiques, couvrant les aspects clés du développement des lignées cellulaires à la formulation du produit final et au contrôle qualité.

Que sont les médicaments protéiques ?

Les médicaments protéiques sont des protéines thérapeutiques conçues pour traiter ou prévenir des maladies. Ils comprennent une gamme variée de molécules telles que :

• Anticorps monoclonaux (AcM) : Anticorps hautement spécifiques qui ciblent des antigènes spécifiques, souvent utilisés en immunothérapie du cancer et dans le traitement des maladies auto-immunes. Les exemples incluent l'adalimumab (Humira®) et le trastuzumab (Herceptin®).
• Protéines recombinantes : Protéines produites à l'aide de la technologie de l'ADN recombinant, permettant la production à grande échelle de protéines thérapeutiques. L'insuline (Humulin®) en est un exemple classique.
• Enzymes : Protéines qui catalysent des réactions biochimiques, utilisées pour traiter des déficiences enzymatiques ou d'autres troubles métaboliques. Les exemples incluent l'imiglucérase (Cerezyme®) pour la maladie de Gaucher.
• Protéines de fusion : Protéines créées en joignant deux ou plusieurs protéines ensemble, souvent utilisées pour améliorer l'efficacité thérapeutique ou cibler des cellules spécifiques. L'étanercept (Enbrel®) est une protéine de fusion utilisée pour traiter la polyarthrite rhumatoïde.
• Cytokines et facteurs de croissance : Protéines qui régulent la croissance et la différenciation cellulaires, utilisées pour stimuler le système immunitaire ou promouvoir la réparation tissulaire. L'interféron alpha (Roferon-A®) et l'érythropoïétine (Epogen®) en sont des exemples.

Le processus de production des médicaments protéiques : une vue d'ensemble

Le processus de production des médicaments protéiques est un processus complexe en plusieurs étapes qui exige des contrôles stricts et une exécution méticuleuse. Le flux de travail général peut être divisé en plusieurs étapes :

1. Développement de lignées cellulaires : Sélectionner et concevoir des cellules pour produire efficacement la protéine souhaitée.
2. Traitement en amont (Upstream Processing) : Cultiver les cellules dans des bioréacteurs pour maximiser l'expression des protéines.
3. Traitement en aval (Downstream Processing) : Isoler et purifier la protéine de la culture cellulaire.
4. Formulation et remplissage/finition (Fill-Finish) : Préparer le produit médicamenteux final dans une formulation appropriée pour l'administration.
5. Contrôle qualité et analyses : Assurer la sécurité, l'efficacité et la cohérence du produit médicamenteux.

1. Développement de lignées cellulaires : le fondement de la production de protéines

La lignée cellulaire utilisée pour la production de protéines est un déterminant essentiel de la qualité et du rendement du produit final. Les lignées cellulaires de mammifères, telles que les cellules d'ovaire de hamster chinois (CHO), sont largement utilisées en raison de leur capacité à effectuer des modifications post-traductionnelles complexes (par exemple, la glycosylation) qui sont souvent essentielles à la fonction et à l'immunogénicité des protéines. D'autres lignées cellulaires, y compris les cellules de rein embryonnaire humain (HEK) 293 et les cellules d'insectes (par exemple, Sf9), sont également utilisées en fonction de la protéine spécifique et de ses exigences.

Considérations clés dans le développement de lignées cellulaires :

• Niveaux d'expression des protéines : La sélection de cellules produisant de grandes quantités de la protéine cible est cruciale pour une fabrication efficace. Cela implique souvent du génie génétique pour optimiser l'expression des gènes.
• Qualité des protéines : La lignée cellulaire doit produire une protéine avec le repliement, la glycosylation et les autres modifications post-traductionnelles corrects pour garantir un bon fonctionnement et minimiser l'immunogénicité.
• Stabilité cellulaire : La lignée cellulaire doit être génétiquement stable pour garantir une production de protéines constante sur plusieurs générations.
• Mise à l'échelle (Scalability) : La lignée cellulaire doit être adaptable à la culture à grande échelle dans des bioréacteurs.
• Conformité réglementaire : La lignée cellulaire doit répondre aux exigences réglementaires en matière de sécurité et de qualité.

Exemple : Développement de la lignée cellulaire CHO

Les cellules CHO sont couramment modifiées pour exprimer des protéines recombinantes à l'aide de diverses techniques, notamment :

• Transfection : Introduire le gène codant pour la protéine cible dans les cellules CHO.
• Sélection : Sélectionner les cellules qui ont intégré avec succès le gène et qui expriment la protéine. Cela implique souvent l'utilisation de marqueurs de sélection (par exemple, des gènes de résistance aux antibiotiques).
• Clonage : Isoler des cellules uniques et les cultiver en lignées cellulaires clonales. Cela garantit que toutes les cellules de la population sont génétiquement identiques.
• Optimisation : Optimiser les conditions de culture cellulaire (par exemple, composition du milieu, température, pH) pour maximiser l'expression et la qualité des protéines.

2. Traitement en amont (Upstream Processing) : cultiver les cellules pour la production de protéines

Le traitement en amont consiste à cultiver la lignée cellulaire sélectionnée dans des bioréacteurs pour produire la protéine cible. Le bioréacteur fournit un environnement contrôlé avec des conditions optimales pour la croissance cellulaire et l'expression des protéines. Les paramètres clés qui doivent être soigneusement contrôlés comprennent la température, le pH, l'oxygène dissous et l'apport en nutriments.

Types de bioréacteurs :

• Bioréacteurs discontinus (Batch) : Un système fermé où tous les nutriments sont ajoutés au début de la culture. C'est une méthode simple et peu coûteuse, mais la production de protéines est limitée par l'épuisement des nutriments et l'accumulation de déchets.
• Bioréacteurs semi-continus (Fed-Batch) : Les nutriments sont ajoutés périodiquement pendant la culture pour maintenir une croissance cellulaire et une expression protéique optimales. Cela permet d'atteindre des densités cellulaires et des rendements en protéines plus élevés que les cultures discontinues.
• Bioréacteurs continus (Perfusion) : Les nutriments sont ajoutés en continu et les déchets sont éliminés en continu. Cela fournit un environnement stable pour la croissance cellulaire et l'expression des protéines, ce qui se traduit par des densités cellulaires et des rendements en protéines encore plus élevés. Les systèmes de perfusion sont souvent utilisés pour la production à grande échelle.

Optimisation des milieux de culture :

Le milieu de culture cellulaire fournit les nutriments et les facteurs de croissance nécessaires à la croissance cellulaire et à la production de protéines. La composition optimale du milieu dépend de la lignée cellulaire et de la protéine cible. L'optimisation du milieu implique d'ajuster les concentrations de divers composants, tels que :

• Acides aminés : Les éléments constitutifs des protéines.
• Vitamines : Essentielles pour le métabolisme cellulaire.
• Facteurs de croissance : Stimulent la croissance et la différenciation cellulaires.
• Sels et minéraux : Maintiennent l'équilibre osmotique et fournissent des ions essentiels.
• Sucres : Fournissent de l'énergie pour le métabolisme cellulaire.

Suivi et contrôle des processus :

Pendant le traitement en amont, il est essentiel de surveiller et de contrôler les paramètres clés du processus pour garantir une croissance cellulaire et une expression protéique optimales. Cela implique l'utilisation de capteurs pour mesurer des paramètres tels que la température, le pH, l'oxygène dissous, la densité cellulaire et la concentration en protéines. Des systèmes de contrôle sont utilisés pour ajuster automatiquement ces paramètres afin de les maintenir dans la plage souhaitée.

3. Traitement en aval (Downstream Processing) : isoler et purifier la protéine

Le traitement en aval consiste à isoler et à purifier la protéine cible de la culture cellulaire. C'est une étape critique dans le processus de production de médicaments protéiques, car elle élimine les impuretés qui pourraient affecter la sécurité et l'efficacité du produit final. Le traitement en aval comprend généralement une série d'étapes, notamment :

Lyse cellulaire :

Si la protéine est située à l'intérieur des cellules, les cellules doivent être lysées pour libérer la protéine. Cela peut être réalisé à l'aide de diverses méthodes, telles que :

• Lyse mécanique : Utilisation d'un homogénéisateur à haute pression ou de la sonication pour briser les cellules.
• Lyse chimique : Utilisation de détergents ou de solvants organiques pour solubiliser les membranes cellulaires.
• Lyse enzymatique : Utilisation d'enzymes pour dégrader les parois cellulaires.

Clarification :

Après la lyse cellulaire, les débris cellulaires doivent être éliminés pour clarifier la solution de protéines. Ceci est généralement réalisé par centrifugation ou filtration.

Purification de la protéine :

La protéine est ensuite purifiée à l'aide d'une variété de techniques chromatographiques, telles que :

• Chromatographie d'affinité : Utilise un ligand qui se lie spécifiquement à la protéine cible. C'est une technique très sélective qui peut atteindre une grande pureté en une seule étape. Par exemple, les anticorps ou les protéines marquées (par exemple, les protéines avec une étiquette His) sont souvent purifiés par chromatographie d'affinité.
• Chromatographie d'échange d'ions : Sépare les protéines en fonction de leur charge. La chromatographie d'échange de cations est utilisée pour lier les protéines chargées positivement, tandis que la chromatographie d'échange d'anions est utilisée pour lier les protéines chargées négativement.
• Chromatographie d'exclusion stérique : Sépare les protéines en fonction de leur taille. Les protéines plus grandes sont éluées en premier, tandis que les protéines plus petites sont éluées plus tard.
• Chromatographie d'interaction hydrophobe : Sépare les protéines en fonction de leur hydrophobicité. Les protéines hydrophobes se lient à la colonne à des concentrations de sel élevées et sont éluées avec des concentrations de sel décroissantes.

Ultrafiltration/Diafiltration :

L'ultrafiltration et la diafiltration sont utilisées pour concentrer la solution de protéines et éliminer les sels et autres petites molécules. L'ultrafiltration utilise une membrane pour séparer les molécules en fonction de leur taille, tandis que la diafiltration utilise une membrane pour éliminer les petites molécules en ajoutant un tampon. Cette étape est cruciale pour préparer la protéine pour la formulation.

Élimination virale :

L'élimination virale est une considération de sécurité essentielle pour les biomédicaments. Le traitement en aval doit inclure des étapes pour éliminer ou inactiver tout virus qui pourrait être présent dans la culture cellulaire. Ceci peut être réalisé par filtration, chromatographie ou inactivation par la chaleur.

4. Formulation et remplissage/finition (Fill-Finish) : préparation du produit médicamenteux final

La formulation consiste à préparer la protéine purifiée sous une forme stable et appropriée pour l'administration aux patients. La formulation doit protéger la protéine de la dégradation, maintenir son activité et garantir sa sécurité.

Considérations clés dans le développement de la formulation :

• Stabilité des protéines : Les protéines sont sensibles à la dégradation par divers facteurs, tels que la température, le pH, l'oxydation et l'agrégation. La formulation doit protéger la protéine de ces facteurs.
• Solubilité : La protéine doit être soluble dans la formulation pour permettre une administration facile.
• Viscosité : La viscosité de la formulation doit être suffisamment faible pour permettre une injection facile.
• Tonicité : La tonicité de la formulation doit être compatible avec les fluides corporels pour éviter la douleur ou l'irritation lors de l'injection.
• Stérilité : La formulation doit être stérile pour prévenir les infections.

Excipients courants utilisés dans les formulations de protéines :

• Tampons : Maintiennent le pH de la formulation. Les exemples incluent les tampons phosphate, citrate et Tris.
• Stabilisants : Protègent la protéine de la dégradation. Les exemples incluent les sucres (par exemple, saccharose, tréhalose), les acides aminés (par exemple, glycine, arginine) et les tensioactifs (par exemple, polysorbate 80, polysorbate 20).
• Modificateurs de tonicité : Ajustent la tonicité de la formulation. Les exemples incluent le chlorure de sodium et le mannitol.
• Conservateurs : Empêchent la croissance microbienne. Les exemples incluent l'alcool benzylique et le phénol. (Note : les conservateurs sont souvent évités dans les formulations à dose unique).

Remplissage/finition (Fill-Finish) :

Le remplissage/finition consiste à remplir de manière aseptique le médicament protéique formulé dans des flacons ou des seringues. C'est une étape critique qui doit être réalisée dans des conditions de stérilité strictes pour éviter toute contamination. Les flacons ou seringues remplis sont ensuite étiquetés, emballés et stockés dans des conditions appropriées.

5. Contrôle qualité et analyses : garantir la sécurité et l'efficacité du produit

Le contrôle qualité (CQ) est une partie essentielle de la production de médicaments protéiques. Il implique une série de tests et d'essais pour s'assurer que le produit médicamenteux répond aux spécifications prédéfinies de sécurité, d'efficacité et de cohérence. Les tests de CQ sont effectués à différentes étapes du processus de production, du développement de la lignée cellulaire à la libération du produit final.

Tests clés du contrôle qualité :

• Test d'identité : Confirme que le produit médicamenteux est la bonne protéine. Cela peut être réalisé à l'aide de diverses méthodes, telles que la cartographie peptidique et la spectrométrie de masse.
• Test de pureté : Détermine la quantité d'impuretés dans le produit médicamenteux. Cela peut être réalisé à l'aide de diverses techniques chromatographiques, telles que la HPLC et le SDS-PAGE.
• Test de puissance (Potency) : Mesure l'activité biologique du produit médicamenteux. Cela peut être réalisé à l'aide d'essais cellulaires ou d'essais de liaison.
• Test de stérilité : Confirme que le produit médicamenteux est exempt de contamination microbienne.
• Test des endotoxines : Mesure la quantité d'endotoxines dans le produit médicamenteux. Les endotoxines sont des toxines bactériennes qui peuvent provoquer de la fièvre et une inflammation.
• Test des pyrogènes : Détecte la présence de pyrogènes, des substances qui peuvent provoquer de la fièvre.
• Test de stabilité : Évalue la stabilité du produit médicamenteux dans le temps dans diverses conditions de stockage.

Techniques analytiques utilisées dans le CQ des biomédicaments :

• Chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC) : Utilisée pour séparer et quantifier différents composants dans un mélange.
• Spectrométrie de masse (SM) : Utilisée pour identifier et quantifier les protéines et autres molécules.
• Électrophorèse (SDS-PAGE, Électrophorèse capillaire) : Utilisée pour séparer les protéines en fonction de leur taille et de leur charge.
• Test immuno-enzymatique (ELISA) : Utilisé pour détecter et quantifier des protéines spécifiques.
• Essais cellulaires : Utilisés pour mesurer l'activité biologique des protéines.
• Interférométrie biocouche (BLI) : Utilisée pour mesurer les interactions protéine-protéine.
• Résonance plasmonique de surface (RPS) : Également utilisée pour mesurer les interactions protéine-protéine et la cinétique de liaison.

Considérations réglementaires

La production de biomédicaments est hautement réglementée par les agences réglementaires du monde entier, telles que la Food and Drug Administration (FDA) américaine, l'Agence européenne des médicaments (EMA) et l'Organisation mondiale de la Santé (OMS). Ces agences établissent des normes pour les processus de fabrication, le contrôle qualité et les essais cliniques afin de garantir la sécurité et l'efficacité des produits biopharmaceutiques. Les principales directives réglementaires comprennent les Bonnes Pratiques de Fabrication (BPF), qui définissent les exigences pour les installations de fabrication, l'équipement et le personnel.

Biosimilaires : un marché en pleine croissance

Les biosimilaires sont des produits biopharmaceutiques qui sont très similaires à un produit de référence déjà approuvé. Ce ne sont pas des copies exactes du produit de référence en raison de la complexité inhérente des molécules biologiques et des processus de fabrication. Cependant, les biosimilaires doivent démontrer qu'ils sont très similaires au produit de référence en termes de sécurité, d'efficacité et de qualité. Le développement et l'approbation des biosimilaires offrent la possibilité de réduire les coûts des soins de santé et d'accroître l'accès des patients à des médicaments importants. Les pays du monde entier ont des voies réglementaires différentes pour l'approbation des biosimilaires, mais le principe sous-jacent est d'assurer la comparabilité avec le produit biologique d'origine.

Tendances futures dans la production de médicaments protéiques

Le domaine de la production de médicaments protéiques est en constante évolution, avec de nouvelles technologies et approches qui émergent pour améliorer l'efficacité, réduire les coûts et améliorer la qualité des produits. Certaines des principales tendances qui façonnent l'avenir de la production de médicaments protéiques comprennent :

• Production en continu : Passer du traitement par lots à la fabrication en continu, ce qui offre une efficacité accrue, des coûts réduits et une meilleure qualité des produits.
• Technologie d'analyse des procédés (PAT) : Utiliser la surveillance et le contrôle des processus en temps réel pour optimiser les processus de fabrication et garantir une qualité de produit constante.
• Technologies à usage unique : Utiliser des équipements jetables pour réduire le risque de contamination et éliminer le besoin de nettoyage et de stérilisation.
• Criblage à haut débit : Utiliser des systèmes automatisés pour cribler un grand nombre de lignées cellulaires et de conditions de processus afin d'identifier les conditions optimales pour la production de protéines.
• Analyses avancées : Développer des techniques analytiques plus sophistiquées pour caractériser la structure et la fonction complexes des médicaments protéiques.
• Médecine personnalisée : Adapter les thérapies médicamenteuses protéiques à des patients individuels en fonction de leur constitution génétique et d'autres facteurs. Cela inclut le développement de diagnostics compagnons pour identifier les patients les plus susceptibles de bénéficier d'une thérapie particulière.
• IA et apprentissage automatique : Utiliser l'intelligence artificielle et l'apprentissage automatique pour optimiser la conception, la production et la formulation de médicaments protéiques. Cela inclut la prédiction de la structure et de la fonction des protéines, l'optimisation des conditions de culture cellulaire et le développement de formulations plus stables et efficaces.

Conclusion

La production de médicaments protéiques est un processus complexe et exigeant qui nécessite une approche multidisciplinaire. Du développement de la lignée cellulaire à la formulation du produit final et au contrôle qualité, chaque étape doit être soigneusement contrôlée pour garantir la sécurité, l'efficacité et la cohérence du produit médicamenteux. À mesure que la technologie continue de progresser, le domaine de la production de médicaments protéiques est prêt pour de nouvelles innovations, menant au développement de thérapies nouvelles et améliorées pour un large éventail de maladies. La demande mondiale croissante de biomédicaments nécessite une amélioration continue des processus de fabrication pour répondre aux besoins des patients du monde entier. Le développement de biosimilaires offre également des opportunités d'élargir l'accès à ces médicaments vitaux.